1  PCR产品的电泳检测时间 
　　一样平常为48h以内，，有些最好于当日电泳检测，，大于48h后带型不规则甚致消逝。。。

2  假阴性，，不泛起扩增条带，，应该怎么办？？？？ 
　　PCR反应的要害环节有①模板核酸的制备，，②引物的质量与特异性，，③酶的质量及用量，， ④PCR循环条件。。。寻找缘故原由亦应针对上述环节举行剖析研究。。。

3  泛起假阳性怎么办？？？？ 
　　泛起的PCR扩增条带与目的靶序列条带一致，，有时其条带更整齐，，亮度更高。。。 
　　引物设计不对适：选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性，，因而在举行PCR扩增时，，扩增出的PCR产品为非目的性的序列。。。靶序列太短或引物太短，，容易泛起假阳性。。。需重新设计引物。。。 
　　靶序列或扩增产品的交织污染：这种污染有两种缘故原由：一是整个基因组或大片断的交织污染，，导致假阳性。。。这种假阳性可用以下要领解决：操作时应小心轻柔，，避免将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。。。除酶及不可耐高温的物质外，，所有试剂或器材均应高压消毒。。。所用离心管及进样枪头等均应一次性使用。。。须要时，，在加标本前，，反应管和试剂用紫外线照射，，以破损保存的核酸。。。二是空气中的小片断核酸污染，，这些小片断比靶序列短，，但有一定的同源性。。？？？？上嗷テ唇樱，与引物互补后，，可扩增出PCR产品，，而导致假阳性的爆发，，可用巢式PCR要领来减轻或消除。。。 

4  泛起非特异性扩增带怎么办？？？？

PCR扩增后泛起的条带与预计的巨细纷歧致，，或大或。。。，或者同时泛起特异性扩增带 与非特异性扩增带。。。非特异性条带的泛起，，其缘故原由：一是引物与靶序列不完全互补、 或引物聚合形成二聚体。。。二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低，，及PCR循环次数 过多有关。。。其次是酶的质和量，，往往一些泉源的酶易泛起非特异条带而另一泉源的酶 则不泛起，，酶量过多有时也会泛起非特异性扩增。。。其对策有：须要时重新设计引 物。。。减低酶量或替换另一泉源的酶。。。降低引物量，，适当增添模板量，，镌汰循环次 数。。。适当提高退火温度或接纳二温度点法(93℃变性，，65℃左右退火与延伸)。。。

4.1  怎样检测引物是否合成的好？？？？

可以在DHPLC上看一下，，80度全变性的情形下一条带就可以了。。。若是合成的欠好，，产品自然不特异了。。。 

4.2  使用了较量好的Taq酶，，且引物没有泛起问题，，思量如下几点： 
　　1。。。模板是否过量？？？？ 
　　2。。。退火温度是否可降高1－2度？？？？ 
　　3。。。Mg的浓度控制在1.5mM?  

5  泛起片状拖带或涂抹带怎么办？？？？ 
　　PCR扩增有时泛起涂抹带或片状带或地毯样带。。。其缘故原由往往由于酶量过多或酶的质量 差，，dNTP浓度过高，，Mg2+浓度过高，，退火温度过低，，循环次数过多引起。。。其对策有：镌汰酶量，，或替换另一泉源的酶。。。②镌汰dNTP的浓度。。。适当降低Mg2+浓 度。。。增添模板量，，镌汰循环次数。。。