M-MLV（重组型逆转录酶）（R1041-R1042）

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M-MLV（重组型逆转录酶）（R1041-R1042）

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R1041( 5000U) R1042(10000U）

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产品详细

M-MLV 逆转录酶

产品说明

M-MLV逆转录酶是由一个 71 kD的单亚基组成的重组型DNA逆转录聚合酶。。。？？？梢源呋RNA或DNA：RNA杂交链为模板的互补DNA 的聚合反应。。。。本酶经修饰RNase H活性比通俗的逆转录酶要弱许多，，，，，因此在合成第一链cDNA的历程中，，，，，可包管RNA的降解水平较低，，，，，从而使得率提高。。。。

产品组分

组分	R1041	R1042
M-MLV (200U/μl)	5000U/25 μl	10000U/50 μl
5× first-strand buffer	100 μl	200 μl

R1041可举行25次逆转录反应，，，，，R1042可举行50次逆转录反应（20 μl 标准 PCR 反应系统，，，，，每次使用 M-MLV 1 μl）。。。。

M-MLV 贮存液因素

20 mM Tris-HCl (pH 7.5)，，，，，200 mM NaCl，，，，，0.1 mM EDTA，，，，，1 mM DTT，，，，，0.01% NP-40，，，，，50% glycerol

5x first-strand buffer 因素

250 mM Tris-HCl (pH 8.3 at 25℃)，，，，，375 mM KCl，，，，，15 mM MgCl₂，，，，，50 mM DTT

生涯条件

-20℃生涯，，，，，阻止重复冻融。。。。

质量检测

逆转录酶活性检测

使用[₃₂P]dCTP作为标记，，，，，200 U的M-MLV以1μg、1.2 kb的RNA为模板举行逆转录反应，，，，，最低可获得120 ng的cDNA，，，，，所得cDNA长度 > 全长的90%。。。。

核酸外切酶活性检测

混淆50 ng的标记DNA或RNA与200 U M-MLV在1×反应缓冲液系统中，，，，，37℃温浴1 h，，，，，检测DNA和RNA降解都不到总量的1%。。。。

核酸内切酶活性检测

混淆1μgⅠ型超螺旋质粒DNA与500 U M-MLV在1×反应缓冲液系统中，，，，，37℃温浴1 h，，，，，琼脂糖电泳检测，，，，，无显着的剪切。。。。

适用规模

第一链cDNA 合成；；；cDNA 文库构建；；；RT-PCR；；；引物延伸；；；3' 和 5' RACE。。。。

注重事项

l 乐成的cDNA合成来自高质量的RNA。。。。高质量的RNA至少应包管全长的完整性并且不含逆转录酶的抑制剂，，，，，如EDTA或 SDS。。。。用于cDNA合成反应的溶液试剂尽可能用DEPC举行处置惩罚，，，，，并在高压灭菌后使用。。。。有些试剂不可用高压灭菌处置惩罚时，，，，，首先用经由灭菌的用具、水等配制溶液后，，，，，再将溶液举行过滤除菌处置惩罚。。。。

l 为了增添贮存RNA样品的稳固性，，，，，可以将RNA消融在去离子的甲酰胺中，，，，，存于-70℃。。。。用于生涯 RNA 的甲酰胺一定不可含有降解RNA的杂物。。。。泉源于胰脏的RNA至少可以在甲酰胺中生涯一年。。。。当准备使用RNA时，，，，，可以使用下列要领沉淀RNA：加入NaCl至0.2 M同时加入4倍体积的乙醇，，，，，室温安排3-5 min，，，，，10,000 rpm离心5 min。。。。

l 在逆转录反应中经常加入RNase抑制剂（RNasin）以增添cDNA合成的长度和产量。。。。在第一链合成反应中，，，，，RNase抑制剂在缓冲液和还原剂（如 DTT）保存的条件下加入，，，，，由于cDNA合成前的历程会使抑制剂变性，，，，，从而释放出RNase。。。。可是RNase抑制剂仅避免RNase A，，，，，B，，，，，C 对RNA的降解，，，，，并不可避免皮肤上的RNase，，，，，因此只管使用了RNase抑制剂，，，，，也要小心不要从手指上引入RNase。。。。