Pfu DNA Polymerase

Cat. #：P1021，
，，P1022，
，，P1023，
，，P1024

产品简介

Pfu DNA Polymerase是极端嗜热性细菌Pyrococcus furiosus泉源的高度热稳固DNA聚合酶，
，，分子量为90 KD。。。。。其保真性是通俗Taq DNA聚合酶的10倍左右。。。。。扩增片断的长度可达5 kb（简朴模板）。。。。。延伸速率为2min/kb（70~75℃，
，，简朴模板可达20s/kb）。。。。。该酶具有5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性，
，，扩增产品具有平最后。。。。。

产品组成

[1] 10× Pfu Buffer分为Mg²⁺ Plus与Mg²⁺ Free两种包装，
，，可利便选择。。。。。如无特殊说明提供10× Pfu Buffer(Mg²⁺ Plus)。。。。。Mg²⁺ Free的10×Pfu Buffer提供25 mM MgCl₂。。。。。

[2] 6× Loading Buffer，
，，若有需要可单独购置（Cat. #：M9041）。。。。。

[3] dNTPs是dATP、dGTP、dCTP和dTTP等摩尔混淆物，
，，P1021/P1023不含dNTPs，
，，若有需要请单独购置（Cat. #：P9011/P9012/P9013）。。。。。

活性界说

一个活性单位（U）指用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，
，，在72℃、30 min内，
，，摄入10 nmol全核苷酸所需的酶量。。。。。

生涯条件

-20℃生涯2年。。。。。

问：Pfu DNA聚合酶的保真性为何高于Taq DNA聚合酶？？

答：这是由于Pfu DNA聚合酶具有3’→5’外切酶活性，
，，可在扩增的历程中，
，，切掉错配的碱基，
，，降低碱基错配率。。。。。Taq DNA聚合酶的碱基过失率为1×10-5，
，，而Pfu

DNA聚合酶的碱基过失率仅为1×10-6。。。。。Pfu DNA聚合酶主要用于基因筛选、克隆表达、突变检测、定点突变等对保真性有很高要求的实验。。。。。其扩增产品只具有

平最后，
，，可直接用于平最后毗连。。。。。要提高TA克隆效率，
，，建议对PCR产品纯化后，
，，加A再举行TA克隆。。。。
，，加A要领见**页。。。。。

问：Pfu DNA聚合酶能扩增多大的片断？？

答：关于简朴模板，
，，可以扩增2 kb以下的片断。。。。。扩增添片断时，
，，能否扩增乐成主要与模板与引物的设计有关。。。。。为获得优异的扩增效果，
，，建议引物长度大于18 bp，
，，

Tm在55-80℃之间，
，，浓度在0.1-0.5μM之间，
，，略高于Taq。。。。。如需要很高的保真性，
，，且又扩增较长片断时，
，，建议选择Fusion pfu DNA聚合酶。。。。。

问：Pfu DNA聚合酶的扩增效率为何低于Taq DNA聚合酶？？

答：这可能决议于Pfu DNA聚合酶自己的结构与特征。。。。。且具有核酸外切酶的活性，
，，容易降解PCR引物。。。。。建议在配制PCR反应时，
，，最后加入Pfu DNA聚合酶或使用

PfuMix。。。。。

问：使用Pfu DNA聚合酶扩增时，
，，有没有须要在冰上配制PCR反应液？？

答：有须要。。。。。建议在冰上配制PCR 反应液后，
，，再放入PCR仪中举行扩增。。。。。这有利于提高扩增的特异性，
，，镌汰非特异性条带配景，
，，获得优异的PCR效果。。。。。