RT-PCR Mix for qPCR(预混型逆转录试剂盒)
货号:R1031 规格:100次(20 ?l反应系统)
产品说明
RT-PCR Mix for qPCR是预混型逆转录反应试剂盒,,操作轻盈,,可快速高效完成逆转录反应。。其中Enzyme Mix含有高效逆转录酶和热敏型DNase,,一步完成基因组DNA的扫除以及RNA的逆转录反应,,RT Buffer包括逆转录反应所需的其他组分,,无需分步多次加样,,降低了样品污染的危害。。同时,,本试剂盒配备了Control Mix,,用于阴性比照反应,,磨练RNA模板中是否有基因组DNA残留。。本试剂盒的逆转录产品对染料法和探针法荧光定量PCR反应均有很好的兼容性,,可举行精准的基因表达剖析。。
产品组分
组分 | R1031(100次) |
Enzyme Mix | 100 μl |
5X RT Buffer | 400 μl |
Control Mix | 20 μl |
RNase-free ddH2O | 1 ml × 2 |
生涯条件
各组分均-20℃生涯,,并阻止重复冻融。。
适用规模
第一链cDNA 合成
注重事项
l 本品含有热敏型DNase,,请于冰上使用本品各组分。。
l 为包管因素匀称,,请将Enzyme Mix、5X RT Buffer及Control Mix划分瞬时离心、奏乐混匀后再吸收使用。。
l 在操作历程中,,注重避免引入RNase导致RNA降解。。RNA最好生涯于-70℃,,阻止重复冻融。。
l cDNA产品应置于-20℃或以下生涯,,阻止重复冻融。。
操作办法
1. 配制反应系统
按以下系统,,在冰浴的无菌无酶离心管中配制反应混淆液:
组分 | 用量 |
5X RT Buffer | 4 μl |
Enzyme Mix | 1 μl |
RNA | 1pg-1?g |
RNase-free ddH2O | 补足至20 μl |
阴性比照反应(可。。
即不加逆转录酶的反应,,产品用于在qPCR中作为阴性比照,,磨练模板RNA中是否有基因组DNA残留
按以下系统,,在冰浴的无菌无酶离心管中配制反应混淆液:
组分 | 用量 |
5X RT Buffer | 4 μl |
Control Mix | 1 μl |
RNA | 1pg-1?g |
RNase-free ddH2O | 补足至20 μl |
2. 举行逆转录反应
将上述混淆液奏乐混匀,,瞬时离心网络至管底。。按以下程序,,在PCR仪中举行反应:
温度 | 时间 |
50℃ | 15 min |
85℃ | 5 sec |
3. qPCR反应及cDNA生涯
cDNA产品可稀释后连忙举行染料法或探针法qPCR反应。。若使用未稀释的cDNA原液,,则体积不可凌驾反应系统的1/10,,以阻止抑制反应效率。。恒久生涯cDNA产品应于-20℃或以下情形中,,并阻止重复冻融。。