FS? Mix Direct for Tissue

Cat. #：P2071b，，P2072b

产品简介

FS? Mix Direct for Tissue是适合组织样本扩增的2×浓缩快速高效PCR预混淆溶液，，含有FS? Taq DNA聚合酶、dNTP混淆物、缓冲液等PCR扩增必需组分（模板与引物除外）。
。。。。使用时，，仅需在扩增系统中加入简朴处置惩罚后的样本处置惩罚液和引物即可举行PCR，，从而可以极大地简化操作历程，，缩短操作时间，，降低污染（加样次数镌汰）。
。。。。FS? Mix Direct for Tissue的反应系统经由优化处置惩罚，，高迅速度的FS? Taq DNA聚合酶确保处置惩罚液中的微量样本获得高效扩增。
。。。。本产品不必举行繁琐的DNA提取
。。。。，最大限度镌汰实验误差和交织污染；；；；；同时依赖特殊的缓冲系统增强PCR扩增的特异性，，包管扩增效果与DNA模板扩增效果同样可靠。
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FS? Taq DNA聚合酶是凭证卵白工程原理，，以Taq DNA聚合酶为基础
。。。。，研发设计的新一代DNA聚合酶。
。。。。本产品具有类似KOD酶的快速扩增能力，，延伸速率为20s/kb（70~75℃，，简朴模板可达5s/kb）。
。。。。是通俗Taq DNA聚合酶的3倍，，可缩短一半以上的扩增时间；；；；；同时具备Taq DNA聚合酶扩增效率高、顺应性广等优点。
。。。。FS? Taq DNA聚合酶使用要领与通俗Taq DNA聚合酶基内情同，，只需注重适当缩短延伸时间。
。。。。该酶具有5'→3'聚合酶活性，，无3'→5'外切酶活性。
。。。。扩增产品具有3'-dA突出端，，可直接用于TA克隆。
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产品组成

本产品分系统中包括溴酚蓝、不含溴酚蓝两类。
。。。。系统中包括溴酚蓝的产品，，PCR扩增产品可直接电泳检测。
。。。。这两类产品的扩增性能无差别。
。。。。如无特殊说明提供系统中包括溴酚蓝的包装。
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生涯条件

-20℃生涯2年。
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质量控制

纯度检测：经质量检测，，产品不含脱氧核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。
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功效检测：PCR要领检测无宿主剩余DNA，，能有用扩增人基因组中的单拷贝基因。
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应用举例

1. 处置惩罚样品

组织：取3-5mg组织置于1.5ml离心管中，，加入180 μl Extraction Solution，，充分涡旋振荡，，95℃温浴10min。
。。。。加入20 μl Neutralization Solution，，充分涡旋振荡，，5,000rpm离心2min，，取0.5-2 μl上清举行扩增。
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头发：取两根带毛囊的头发，，剪下带毛囊的发根放入1.5ml离心管中，，加入180 μl Extraction Solution，，充分涡旋振荡，，95℃温浴10min。
。。。。加入20 μl Neutralization Solution，，充分涡旋振荡，，5000rpm离心2min，，取0.5-2 μl上清举行扩增。
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口腔拭子：取样前30min内请勿进食及饮水，，使用无菌棉签在口腔内擦拭10次。
。。。。将棉球剪下置于1.5ml离心管中，，加入180 μl Extraction  Solution，，充分涡旋振荡，，95℃温浴10min。
。。。。加入20 μl Neutralization Solution，，充分涡旋振荡，，5,000rpm离心2min，，取0.5-2 μl上清举行扩增。
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作育细胞：若是是悬浮作育细胞直接取1×10³-10⁴当量的细胞加入到50 μl PCR反应系统中即可。
。。。。若是是贴壁作育细胞，，取3-5mg细胞组织置于1.5ml离心管中，，加入180 μl Extraction Solution，，充分涡旋振荡，，95℃温浴10min。
。。。。加入20 μl Neutralization Solution，，充分涡旋振荡，，5,000rpm离心2min，，取0.5-2 μl上清举行扩增。
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血液、淋巴液DNA病毒：取100 μl血清或淋巴液至1.5ml离心管中，，加入180 μl Extraction Solution，，充分涡旋振荡，，95℃温浴10min。
。。。。加入20 μl Neutralization  Solution，，充分涡旋振荡，，12,000rpm离心10min，，取0.5-2 μl上清举行扩增。
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2. 配制反应系统

请于冰上设置反应系统，，系统巨细与组分用量与添加顺序可调解：

[1] 引物终浓度建议规模：0.1-1 μM。
。。。。特异性差时可降低浓度，，效率低时可提高浓度。
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[2] 可单独订购超纯水（Cat. #：P9021/P9022/P9023）。
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[3] 可单独订购25mM MgCl₂（Cat. #：P9031）和PCR Enhancer（Cat. #：P9041）。
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3. 设定反应程序举行PCR反应

大大都模板的快速扩增条件：

[1] 退火温度应凭证Tm值较低的引物来设。
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[2] 延伸时间按20 sec/kb来设最佳。
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1kb简朴模板的快速扩增条件：

由于1kb简朴模板的二级结构简朴，，且长度较短，，可同时缩短变性、退火时间至15s，，延伸时间20s，，以实现快速扩增。
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4. 剖析效果

反应产品可直接举行琼脂糖凝胶电泳，，通过凝胶成像装备视察目的条带的扩增情形。
。。。。若有需要，，可举行割胶接纳。
。。。。无产品或产品量少的刷新步伐有：1调解退火温度；；；；；2镌汰抑制剂的影响，，如提取的基因组DNA中含有抑制扩增的因素，，需要高倍稀释（1: 10000）后使用；；；；；3接纳乙醇沉降洗脱，，提高模板DNA的纯度；；；；；4使用PCR添加剂，，如PCR Enhancer（Cat. #：P9041）、MgCl₂（Cat. #：P9031）等可提高产量。
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操作注重事项

处置惩罚的组织样本往往不会完全消融，，这是正常征象。
。。。。消融在处置惩罚液中的组织样本足够知足FS? Mix Direct for Tissue扩增的需要。
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室温下FS? Taq DNA聚合酶有一定的活性，，为阻止爆发非特异性扩增，，请于冰上设置反应系统，，并且最后添加模板DNA。
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延伸时间视片断长度而定。
。。。。一样平常情形，，≤500bp目的片断延伸15s，，500bp-1kb延伸20s，，＞1kb延伸时间按20s/kb盘算。
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FS? Taq DNA聚合酶具有脱氧核苷酸转移酶活性，，因此在PCR产品3’最后通常唬唬；；峒由弦桓龆嘤嗟耐蜒跸汆堰屎塑眨，可举行TA克隆。
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FS? Mix Direct for Tissue也可接纳通例程序扩增。
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引物设计注重事项

引物长度一样平常在15-30个碱基之间；；；；；上下游引物3’最后阻止互补，，阻止泛起3个以上重复的G或C，，或泛起发夹结构，，不然会爆发非特异性扩增；；；；；GC含量控制在40-60%，，且上下游引物GC含量只管靠近；；；；；Tm值控制在55-65℃之间，，且上下游引物Tm值只管靠近，，特殊附加序列（酶切位点、修饰等）是非模板匹配序列，，不加入Tm值盘算。
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相关产品

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问：使用FSTM Mix Direct for tissue扩增时是否需要使用快速PCR扩增仪？？

答：不需要，，使用通俗的PCR扩增仪即可。
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问：FSTM MixDirect for  tissue的使用与通俗Taq Mix 有何差别？？

答：使用要领与通俗PCR Mix 基内情同，，只需注重扩增条件中时间适当缩短。
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问：FSTM Mix Direct for  tissue扩增产品是否可用于TA克隆
。。。？？

答：FSTM Taq DNA 聚合酶 没有3-5外切酶活性，，以是PCR产品最后带 A，，可举行TA克隆。
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问：FSTM 系列与KOD系列产品相比有什么区别？？

答：KOD有3-5外切酶活性，，保真性较量高，，但正由于有外切酶活性，，容易降解引物及模板，，以是其迅速度及易用性方面不如FSTM Taq。
。。。。通俗检测及基因诊断很少用到KOD

酶。
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