Long Taq Mix

Cat. #：P2061，，
，
，，P2062

产品简介

Long Taq Mix是2×浓缩的PCR扩增预混和溶液，，
，
，，含有Long Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液等PCR扩增必需组分（模板与引物除外）。。。使用时，，
，
，，仅需在扩增系统中加入模板和引物即可举行PCR，，
，
，，大大简化操作历程，，
，
，，缩短操作时间，，
，
，，降低污染（加样次数镌汰）。。。同时，，
，
，，由于系统内含有优化剂与增强剂，，
，
，，能够显著增强PCR扩增的迅速度。。。

Long Taq DNA聚合酶是专门用于扩增添片断的嗜热DNA聚合酶，，
，
，，其保真性是通俗Taq DNA聚合酶的3倍左右。。。扩增片断的长度可达20 kb（简朴模板）。。。在扩增重大模板（如GC-rich或重复序列）时，，
，
，，Long Taq DNA聚合酶的扩增效率显著高于Taq DNA聚合酶。。。因此Long Taq DNA聚合酶适合＞5kb的DNA片断及重大模板的扩增。。。延伸速率为20s/kb（70~75℃，，
，
，，简朴模板可达5s/kb）。。。扩增产品具有两种最后：平最后与3'-dA。。。

产品组成

本产品分含系统中包括溴酚蓝、不含溴酚蓝两类。。。系统中包括溴酚蓝的产品，，
，
，，PCR扩增产品可直接电泳检测。。。这两类产品的扩增性能无差别。。。如无特殊说明提供系统中包括溴酚蓝的包装。。。

[1] PCR Enhancer主要通过降低DNA模板的解链温度，，
，
，，增进DNA模板的有用扩增，，
，
，，增添PCR反应的迅速度和特异性。。？？？？傻ザ蓝┕海Cat. #：P9041）。。。

生涯条件

-20℃生涯2年。。。

质量控制

纯度检测：经质量检测，，
，
，，产品不含脱氧核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。。。

功效检测：PCR要领检测无宿主剩余DNA，，
，
，，能有用扩增人基因组中的单拷贝基因。。。

应用举例

1. 配制反应系统

请于冰上设置反应系统，，
，
，，系统巨细与组分用量与添加顺序可调解：

[1] 引物终浓度建议规模：0.1-1 μM。。。特异性差时可降低浓度，，
，
，，效率低时可提高浓度。。。

[2] 差别模板最佳用量差别，，
，
，，部分DNA模板建议用量如下表（50 μl反应系统）。。。

[3] 可单独订购超纯水（Cat. #：P9021/P9022/P9023）。。。

[4] 可单独订购25mM MgCl₂（Cat. #：P9031）。。。

2. 设定反应程序举行PCR反应

[1] 退火温度应凭证Tm值较低的引物来设。。。

[2] 延伸时间按20s/kb来设最佳（简朴模板可达5s/kb）。。。

3. 剖析效果

反应产品可直接举行琼脂糖凝胶电泳，，
，
，，通过凝胶成像装备视察目的条带的扩增情形。。。若有需要，，
，
，，可举行割胶接纳。。。

无产品或产品量少的刷新步伐有：1调解退火温度；；；；；2镌汰抑制剂的影响，，
，
，，如提取的基因组DNA中含有抑制扩增的因素，，
，
，，需要高倍稀释（1:；；；；；10000）后使用；；；；；3接纳乙醇沉降洗脱，，
，
，，提高模板DNA的纯度；；；；；4使用PCR添加剂，，
，
，，如PCR Enhancer（Cat. #：P9041）、MgCl₂（Cat. #：P9031）等可提高产量。。。

操作注重事项

1 室温下Long Taq DNA聚合酶有一定的活性，，
，
，，为阻止爆发非特异性扩增，，
，
，，请于冰上设置反应系统，，
，
，，并且最后添加模板DNA。。。

2 Long Taq Mix的扩增产品有两种最后：平最后和3'-dA突出最后。。。如要举行TA克隆，，
，
，，请先举行加A反应，，
，
，，以提高克隆效率。。。（加A反应：参考如下系统，，
，
，，72℃，，
，
，，15-30min）

3 Long Taq Mix既可扩增添片断的DNA，，
，
，，也可扩增小片断（几百bp）的DNA。。。

4 PCR Enhancer主要在Long Taq Mix扩增无效果或扩增效果欠好时使用。。。使用退却火温度需在原温度上降低2-3℃，，
，
，，不然会降低PCR效率，，
，
，，建议使用Tm值较高的引物。。。PCR Enhancer能够与所有的耐热DNA聚合酶配相助用。。。

引物设计注重事项

引物长度一样平常在15-30个碱基之间；；；；；上下游引物3’最后阻止互补，，
，
，，阻止泛起3个以上重复的G或C，，
，
，，或泛起发夹结构，，
，
，，不然会爆发非特异性扩增；；；；；GC含量控制在40-60%，，
，
，，且上下游引物GC含量只管靠近；；；；；Tm值控制在55-65℃之间，，
，
，，且上下游引物Tm值只管靠近，，
，
，，特殊附加序列（酶切位点、修饰等）是非模板匹配序列，，
，
，，不加入Tm值盘算。。。

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