通用菌落PCR检测试剂盒

Cat. #：P8011，，，，，P8012

产品简介

本试剂盒使用PCR原理，，，，，连系本公司的快速DNA聚合酶（延伸速率20s/kb），，，，，设计适用性广的最佳引物，，，，，优化PCR反应缓冲系统，，，，，同时简化检测要领，，，，，可用于种种常用T载体克隆的筛选检测。。。

产品组成

活性界说

一个活性单位（U）指用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，，，，，在72℃、30 min内，，，，，摄入10 nmol全核苷酸所需的酶量。。。

生涯条件

-20℃生涯。。。

质量控制

纯度检测：经质量检测，，，，，产品不含脱氧核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。。。

功效检测：PCR要领检测本试剂盒无宿主剩余DNA，，，，，也无其他DNA污染，，，，，能有用完成PCR扩增。。。

应用举例

1. 准备样品

将住宿作育的平板上的菌落编号后，，，，，用灭菌的牙签挑取单克隆菌体的一部分至反应系统中；；或在1.5 ml EP管中分装500 μl含有响应抗生素的LB作育基，，，，，并做好标记，，，，，用无菌牙签提取单个菌落至上述作育基中，，，，，37振荡（250-300rpm）作育4h，，，，，取1-2 μl菌液用于扩增。。。

2. 配制反应系统

请于冰上设置反应系统，，，，，系统巨细与组分用量与添加顺序可调解：

*包括了上下游引物，，，，，扩增巨细约为：克隆片断+250 bp。。。

● 加入各组分后，，，，，请用枪头重复吸吹一再，，，，，充分混匀。。。

● 在一次配制多管需分装时建议按（n+1）的反应液量配制，，，，，以确保分派时的消耗不会影响实验，，，，，同时选择大于总体积的离心管便于混匀。。。

● 如需使用其他体积的PCR反应系统，，，，，请按各组分比例缩减或增添各组分用量。。。

● 将混匀的各管短暂离心，，，，，置于PCR仪中。。。

3. 设定反应程序举行PCR反应

● 设定PCR程序时，，，，，请凭证目的片断巨细决议延伸时间，，，，，若是目的片断巨细为500 bp时，，，，，延伸时间为15 sec；；500 bp-1 kb，，，，，延伸时间20 sec；；目的片断>1 kb时，，，，，延伸时间按20s/kb盘算。。。

3. 剖析效果

反应竣事后取2-5 μl反应产品与loading buffer混匀后举行琼脂糖凝胶电泳，，，，，通过凝胶成像装备视察目的条带的扩增情形。。。

注重事项

请严酷凭听说明书提供的实验系统及实验条件举行试验。。。

室温下DNA聚合酶有一定的活性，，，，，为阻止爆发非特异性扩增，，，，，请于冰上设置反应系统，，，，，并且最后添加FS^TM Mix或模板DNA。。。

挑取菌落时，，，，，应选择单菌落，，，，，不要挑取太多菌体，，，，，以免影响PCR效果。。。

部分适用T载体参考下表：