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PCR教学试剂盒 (P8021-P8022)

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PCR教学试剂盒 (P8021-P8022)

价钱: ¥120.00
运费 ¥0.00
P8021(30次 500 bp) P8022( 30次 1,000 bp)

PCR教学试剂盒

Cat. #:P8021,,,P8022

产品简介

本试剂盒是凭证教学实验内容设计的,,,切合标准扩增流程的,,,教学用PCR反应试剂盒。。本试剂盒所提供的模板为插入特定巨细DNA片断的PBluescipt SK(+)重组质粒;;;;引物为凭证所插入DNA序列和扩增片断巨细差别设计的上下游引物。。PCR效果可获得特定大。。500 bp或1,000 bp)的PCR产品。。

 

产品组成

Component

P8021

(500 bp,,,30次)

P8022

(1,000 bp,,,30次)

DNA模板

150 μl,,,500 bp

150 μl,,,1,000 bp

上游引物 (10 μM)

75 μl

75 μl

下游引物(10 μM)

75 μl

75 μl

dNTP混淆物(2.5 mM)

150 μl

150 μl

Taq DNA聚合酶(2.5 U/μl)

40 μl

40 μl

10×PCR缓冲液

500 μl

500 μl

超纯水

1 ml

1 ml

说明书

1份

1份

 

活性界说

一个活性单位(U)指用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,,,在72℃、30 min内,,,摄入10 nmol全核苷酸所需的酶量。。

 

生涯条件

10×PCR缓冲液生涯于4℃,,,其他因素-20℃生涯。。

 

质量控制

纯度检测:经质量检测,,,产品不含脱氧核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。。

功效检测:PCR要领检测本试剂盒无宿主剩余DNA,,,也无其他DNA污染,,,能有用完成PCR扩增。。

 

应用举例

1. 配制反应系统

请于冰上设置反应系统,,,系统巨细与组分用量与添加顺序可调解:

Ordinal

Component

Volume

(25 μl reaction volume)

Volume

(50 μl reaction volume)

Volume

(50 μl reaction volume,,,n管)

1

10×PCR缓冲液(Mg2+ Plus)

2.5 μl

5 μl

5×(n+1) μl

2

dNTPs(2.5mM)

2 μl

4 μl

4×(n+1) μl

3

上游引物   (10 μM)

1 μl

2 μl

2×(n+1) μl或a μl×(n+1)

4

下游引物   (10 μM)

1 μl

2 μl

2×(n+1) μl或a μl×(n+1)

5

Taq   DNA聚合酶(2.5U/μl)

0.5 μl

1 μl

1×(n+1) μl或a μl×(n+1)

6

template   DNA

2 μl

4 μl

4×(n+1) μl或a μl×(n+1)

7

超纯水

16 μl

32 μl

32×(n+1) μl

8

石蜡油

如不可设置顶盖温度,,,需适量加入石蜡油。。

● 加入各组分后,,,请用枪头重复吸吹一再,,,充分混匀。。

● 在一次配制多管需分装时建议按(n+1)的反应液量配制,,,以确保分派时的消耗不会影响实验,,,同时选择大于总体积的离心管便于混匀。。

● 如需使用其他体积的PCR反应系统,,,请按各组分比例缩减或增添各组分用量。。

● 组分中引物、DNA模板、Taq DNA聚合酶常用于梯度实验,,,若有调解,,,请注重调超纯水的用量至响应的系统。。

● 将混匀的各管短暂离心,,,置于PCR仪中。。

 

2. 设定反应程序举行PCR反应

Stage  

Temperature

Time

Number   of Cycles

Initial   Denaturation

94℃

3   min

1

Denaturation

94℃

30   sec

30

Annealing

55℃

30   sec

Extension

72℃

30   sec or 45 sec

Final   Extension

72℃

5   min

1

● 设定PCR程序时,,,请凭证目的片断巨细决议延伸时间,,,若是目的片断巨细为500 bp时,,,延伸时间为30 sec,,,目的片断为1 kb时,,,延伸时间为45 sec。。

 

3. 剖析效果

反应竣事后取2-5 μl反应产品与loading buffer混匀后举行琼脂糖凝胶电泳,,,通过凝胶成像装备视察目的条带的扩增情形。。

● 500 bp产品建议电泳条件为1.7%琼脂糖凝胶,,,0.5×TBE,,,7 V/cm,,,20-40 min,,,建议Marker为 DSTM 2000(M1101)。。

● 1 kb产品建议电泳条件为1.0%琼脂糖凝胶,,,1×TAE,,,7 V/cm,,,20-40 min,,,建议Marker为 DSTM 5000(M1111)。。

 

注重事项

请严酷凭听说明书提供的实验系统及实验条件举行试验。。

室温下Taq DNA聚合酶有一定的活性,,,为阻止爆发非特异性扩增,,,请于冰上设置反应系统,,,并且最后添加Taq DNA聚合酶或模板DNA。。

挑取菌落时,,,应选择单菌落,,,不要挑取太多菌体,,,以免影响PCR效果。。


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